甲型H1N1（2009）核酸檢測試劑盒

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廣州健侖生物科技有限公司

產(chǎn)品規(guī)格：50T/盒；

 保存條件：避光 -20度 保存。

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甲型H1N1（2009）核酸檢測試劑盒

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組織培養(yǎng)嘅單層細(xì)胞可用勻漿緩沖液裂解，都可直頭喺SDS凝膠加樣緩沖液中裂解；制備好嘅樣品用做SDS- PAGE分析。
2）電泳按常規(guī)方法進(jìn)行SDS-PAGE。
2.蛋白質(zhì)由凝膠轉(zhuǎn)移到NC膜上（半干式轉(zhuǎn)移）
1）戥頭凝膠：用轉(zhuǎn)膜緩沖液戥頭，5min×三次。
2）膜處理：將濾紙同NC膜，一同喺轉(zhuǎn)膜緩沖液中浸泡10min。
3）轉(zhuǎn)膜：
a.轉(zhuǎn)膜裝置由下至上依次按陽極碳黑、3層厚濾紙、PVDF尼龍膜、凝膠、3層厚濾紙、陰極碳板嘅順序放好，濾紙、凝膠、PVDF尼龍膜精確對齊，每一步抹得甩氣泡，上責(zé)500g重物，將碳板上面多余嘅液體吸干。
b.用支架夾緊上述各層，置電轉(zhuǎn)移槽中，NC膜一側(cè)靠正極，凝膠一側(cè)靠負(fù)極。接通電源，40V、約1.5A轉(zhuǎn)移1.5～6h。過咗時(shí)間長短依靶蛋白分子量大小嚟較。
c.轉(zhuǎn)移結(jié)束后，斷開電源將膜拎出，鎅攞對量膜條做免疫印跡。
d.將有蛋白Marker嘅條帶染色，放入膜染色液中50s后，喺50%甲醇中多次脫色，至背景清晰，跟住用對蒸水洗，風(fēng)干夾于兩層濾紙中保存，留喺騷咸濕結(jié)果作對比。
3.免疫探測包畀轉(zhuǎn)印到膜上嘅靶抗原與*抗體（特異抗體）反應(yīng)、與酵素標(biāo)第二抗體（抗抗體）反應(yīng)，與及用酵素相應(yīng)嘅底物處理后進(jìn)行靶蛋白（抗原）信號檢測。
1）用0.01mol/L PBS洗膜，5min×三次。
2）加封閉液（5%脫脂奶粉或者2%牛血清白蛋白），浸泡畀轉(zhuǎn)印膜，室溫或者37℃（平緩震緊）反應(yīng)1～3h，以封閉轉(zhuǎn)印膜上啲非特異性蛋白質(zhì)嘅潛在結(jié)合位點(diǎn)，逃過非特異性反應(yīng)。
3）棄封閉液，用0.01mol/L PBS洗膜，5min×三次，振蕩。
4）將封閉好嘅轉(zhuǎn)印膜浸入*抗體溶液（按啱稀釋比例，用1/2量0.01mol/L PBS加1/2量封閉液稀釋）中，抗體液用量約0.2ml/cm2，37℃反應(yīng)1～2h或者4℃反應(yīng)12h以上，保持平緩震緊。陰性對照，以1%BSA取代一抗，其余步驟與實(shí)驗(yàn)組相同。
5）棄一抗，用0.01mol/L PBS分別就洗膜，10min×三次，振蕩。
6）加辣根過氧化物酵素（HP）偶聯(lián)二抗溶液〔稀釋方法同（4）〕，室溫下反應(yīng)1～2h，保持平緩震緊。
7）棄二抗，用0.01mol/L PBS洗膜，10min×4次，振蕩。